一般社団法人
日本細胞生物学会Japan Society for Cell Biology

NGMプレート（線虫飼育培地）作製

author	坂口　愛沙、佐藤　健
所属	群馬大学生体調節研究所細胞構造分野
連絡先	このプロトコルへのお問合せ
Home Page	traffic.dept.med.gunma-u.ac.jp/index.html
Keyword	線虫、プレート
Published	2014-06-19	Last Update	2014-06-19
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概要・原理

線虫C. elegansの飼育のためのプレートを作製する．

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装置・器具・試薬

• NGMプレート作製準備 （1枚分）：
  NaCl, agar, peptone, cholesterol (ethanol で 5mg/ml にしておく), 蒸留水 1M potassium phosphate pH6, 1M MgSO₄, 1M CaCl₂
  大腸菌OP50 culture (2xYTやLB培地で増やしたculture）
  オートクレーブ
  60mm dish
  三角フラスコ
  スターラー，スターラーバー

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詳細　　＊それぞれの写真をクリックすると拡大します。

• 三角フラスコにスターラーバーとNaCl 3g, agar 17g, peptone 2.5g, 5mg/ml cholesterol 1mLを入れ，蒸留水で975mLにメスアップし，オートクレーブする．
• 1M potassium phosphate pH6, 1M MgSO₄, 1M CaCl₂を別々に作製し，それぞれオートクレーブしておく．
• オートクレーブ後の1をスターラーで撹拌しながら60～70℃くらいになるまで冷まし，2の1M potassium phosphate pH6 25mL, 1M MgSO₄ 1mL, 1M CaCl₂ 1mL を加える．
• 60mmディッシュに10～11mLずつ分注し1～2日間ほど乾かす．（実験内容に応じて35mm, 100mm, 150mmディッシュに分注する．）
• 4の乾いたプレートにOP50 cultureを塗布し1～2日間ほど乾かす．室温で1週間ほど，コールドルームで数カ月間保存可能．

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工夫とコツ

• プレートは大腸菌を塗布する前に十分に乾かす．
  餌（大腸菌）がプレートの端にあると線虫がプレートの壁をのぼって乾いて死んでしまうので、大腸菌を塗布する際は端に広がらないように気をつける．

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参考文献

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