The S2 cell line was derived from a orimary culture of late stage Drosophila melanogaster embryos. Many features of the S2 cell line suggest that it is derived from a macrophage-like lineage. S2 cells grow at room temperature without CO2 as a loose, semi-adherent monolayer in tissue culture flasks. (from Invitrogen S2 cells manual) transfectionの方法として、ここではリン酸Ca法を紹介する。 発現ベクターとして、メタロチオネインプロモーターがよく使用されるが、CMV promoterも使用可能である。Drosophila genomics resource center (https://dgrc.cgb.indiana.edu/)またはInvitrogenから入手可能。

culture medium

Sigma Schneider’s Insect Medium S0146 10% FBS; penicillin-streptomycin

transfection試薬

Invitrogen Calcium Phosphate Transfection kit Cat.No. K2780-01

1. Cell culture 細胞は半浮遊細胞なので、ピペッティングではがすことができる。 3-4日に一度、1/10-1/20で継代する。
2. transfection 前日、24 well-plateに、1 x 106 cell/mlの細胞を500 ul /wellまきこむ。
3. transfection当日、 DNA 3 ug 2M CaCl2 6 ul を滅菌水で50 ulになるようupする。（solution A）
4. solution Aを2 x HBS溶液にゆっくり少しずつdropする。 Dropするごとにvortexをかけ、できるだけ素早くsolution Aが均一になるようにする。 30-40 min R.T 静置
5. total 100 ulのtransfection溶液を細胞に滴下する。
6. 約24時間後に、mediumを交換する。 １日後～３日後にタンパク質の発現を確認する。