坂口 愛沙、佐藤 健
群馬大学生体調節研究所細胞構造分野
概要・原理
線虫C. elegansの飼育のためのプレートを作製する．
装置・器具・試薬
NGMプレート作製準備 （1枚分）：
NaCl, agar, peptone, cholesterol (ethanol で 5mg/ml にしておく), 蒸留水 1M \potassium phosphate pH6, 1M MgSO4, 1M CaCl2
大腸菌OP50 culture (2xYTやLB培地で増やしたculture）
オートクレーブ
60mm dish
三角フラスコ
スターラー，スターラーバー
詳細
- 三角フラスコにスターラーバーとNaCl 3g, agar 17g, peptone 2.5g, 5mg/ml cholesterol 1mLを入れ，蒸留水で975mLにメスアップし，オートクレーブする．
- 1M potassium phosphate pH6, 1M MgSO4, 1M CaCl2を別々に作製し，それぞれオートクレーブしておく．
- オートクレーブ後の1をスターラーで撹拌しながら60～70℃くらいになるまで冷まし，2の1M potassium phosphate pH6 25mL, 1M MgSO4 1mL, 1M CaCl2 1mL を加える．
- 60mmディッシュに10～11mLずつ分注し1～2日間ほど乾かす．（実験内容に応じて35mm, 100mm, 150mmディッシュに分注する．）
- 4の乾いたプレートにOP50 cultureを塗布し1～2日間ほど乾かす．室温で1週間ほど，コールドルームで数カ月間保存可能．
工夫とコツ
プレートは大腸菌を塗布する前に十分に乾かす． 餌（大腸菌）がプレートの端にあると線虫がプレートの壁をのぼって乾いて死んでしまうので、大腸菌を塗布する際は端に広がらないように気をつける．
